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ARN VIH

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IgG. p24 Ag. IgM. 0. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Semaines. Sensitivité des différentes générations tests de dépistage. ARN VIH. 4 ème Géné ou T. combiné 1997. Fenêtre sérologique. 3 ème Géné 1989. 2 ème Géné 1988 (P. recombinantes ). 1 ère Géné 1985 (viral lysat).

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Presentation Transcript
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IgG

p24

Ag

IgM

0

1

2

3

4

5

6

7

8

Semaines

Sensitivité des différentes générations tests de dépistage

ARN VIH

4ème Géné ou

T. combiné 1997

Fenêtre sérologique

3ème Géné 1989

2ème Géné 1988 (P. recombinantes )

1ère Géné 1985 (viral lysat)

slide4

Problème de Sensitivité des premiers tests combinés

Les tests combinés apparus entre 1997 et 2000 présentent un seuil de détection élevé par rapport au test d’antigène p24

  • Laperche et al., Transfus Clin Biol. 2000
  • Ly et al., Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2001
  • Weber, B. 2003. AIDS

Problème de Spécificité des premiers tests combinés

99,5 à 99,6 % moins bonne que les tests de détection d’anticorps

  • Gürtler et al., J. Virol. Methods. 1998
  • Weber et al., J. Clin. Microbiol. 1998
  • Ly et al., J. Clin. Microbiol. 2000
slide5

Sensitivité de la détection d’Ag p24

(panel d’Ag VIH SFTS : LAI sous-type B)

slide6

Ly et al, Journal of Clinical Microbiology, 2000 “ Contribution of combined detection assays of p24 antigen and anti-human immunodeficiency virus (HIV) antibodies in diagnosis of primary HIV infection by routine testing. ”

Séroprévalence élevée Population : 1.6%

  • 5 laboratoires
  • 29 657 échantillons 3ème génération et VIDAS HIV DUO

VIDAS HIV DUO / 3rd Gen EIApos/pos pos/neg neg/pos

453 160 42

Western blot positif 449 0 0

p24Ag positif 17

Suivi Western blot positif 4/4 17/17 0

29 002 négatifs

17/470 (3.6%) VIH infection détectée par VIDAS HIV DUO

Spécificité VIDAS Duo : 99.51% ;

Spécificité 3èmeGen EIA: 99.85%

slide8

Could the new HIV combined p24 antigen and antibody (Ag/Ab) assays replace p24 antigen specific assays ?

Ly et al.J. Virol. Methods 2007

slide9

Spécificité

1 005 échantillons négatives en VIH provenant de 4 laboratoires privés français

slide10

Sensitivité analytique: Limite de détection d’Ag VIH-1

(panel d’Ag VIH SFTS : LAI sous-type B)

slide11

Panel BBI PRA 801

- pgVIH/ml(panel de référence française SFTS ou Afssaps)

- pg p24/ml(DuPont)

- mIU/ml (W.H.O: Worth Health Organization)

x 3,6

slide12

Sensitivité clinique

23 VIH-1 Seroconversion Panels

  • 9 panels BBI :
    • 923, 932, 941, 944, 952, 953, 954, 957, 958,
  • 11 panels de NABI :
    • SV-0251, 261, 281, 321, 331, 371, 401, 404, 4888,
    • 37748, 122399,
  • 3 panels de BCP :
    • 9013, 9016, 6243
slide13

0

1

2

3

4

5

6

7

8

Semaines

Importance du choix des panels de séroconversion

dans l’évaluation des tests Combinés

1

2

3

Test combiné

ou 4ème génération

IgG

Test d’anticorps

ou3ème génération

Ag p24

IgM

slide14

Retard par joursen moyenne vis à vis de PCR

< 20 pg/ml

5 – 6 jours

2004-2005

Detect HIV v.4

< 30 pg/ml

2001-2002

PCR

VIDAS DUO Ultra

4.04

VIDAS Ultro Quick

5

Coulter HIV-1 Ag

5.13

ARCHITECT HIV Combo

5.17

Genscreen HIV Ultra

5.5

AxSYM HIV Ag/Ab Combo

5.78

Cobas Core HIV Combi

6.17

6.78

Murex HIV Ag/Ab Combo

2004

7.76

Modular HIV Combi

VIDAS HIV DUO

8.09

8.29

Genscreen Plus HIV Ag/Ab Combo

Genscreen HIV 1/2 v2

8.78

< 2000

Enzygnost HIV Integral

9.37

Vironostika HIV Uniform II Ag/Ab

10

Ortho HIV-1/HIV-2 Ab Capture

10.25

0

2

4

6

8

10

12

Days

Classic Method: Maximum delay method

Format Microplaque

slide15

Retard par joursen moyenne vis à vis de PCR

PCR

3.5 – 4.5 jours

VIDAS DUO Ultra

2.35

ARCHITECT HIV Combo

2.74

2004-2005

VIDAS Ultro Quick

2.83

Coulter HIV-1 Ag

3.04

3.35

Genscreen HIV Ultra

3.48

AxSYM HIV Ag/Ab Combo

2001-2002

Murex HIV Ag/Ab Combo

3.86

Cobas Core HIV Combi

4.09

Genscreen Plus HIV Ag/Ab Combo

4.05

2004

4.73

Modular HIV Combi

5.17

VIDAS HIV DUO

< 2000

6.15

Genscreen HIV 1/2 v2

6.25

Enzygnost HIV Integral

6.6

Vironostika HIV Uniform II Ag/Ab

6.81

Ortho HIV-1/HIV-2 Ab Capture

Jour

0

1

2

3

4

5

6

7

8

Microplate format

Paul Erhlich Institut (PEI) calculation method (negative + 1 day)

slide16

Sensibilité de la détection des anticorps: Panel BCP9017

Ratio (s/co)= > 1 : Positif - < 0,9 : Négatif

slide17

Importance de la qualité des anticorps monoclonaux utilisés dans les trousses pour la détection d’Ag p24.

Tersmette et al., Virology, 1989“Detection and subtyping of HIV-1 isolates with a panel of characterized monoclonal antibodies to HIV p24 gag” : problème de détection d’Ag p24 avec les anticorps monoclonaux sur certaines souches virales.

Maniez et al, Spectra biologie, 1997« Évaluation des trousses de dépistage de l’Ag p24 du VIH »: 7 trousses d’Ag p24 avec problème de sensibilité vis-à-vis de certaines souches VIH-1.

slide18

Diversité du VIHConséquences pour la détection d’Ag p24

  • 31 surnageants de culture de sous-types VIH-1:

1 A; 8 CRF01_AE (circulating recombinant ); 7 B; 5 C;3 D; 3 F; 1 G; 1 O; et 2 CRF02_AG

Chaque surnagent ayant 4 concentrations différentes titrées avec la trousse Innotest HIV Antigen (Innogenetics):

4 - 24 pg VIH /ml

10 - 75

22 - 150

61 - 356

slide19

Limite de détection de l’Ag VIH avec 31 panels d’Ag

Arcitect

AxSym

Murex

Vidas Ultra

Vidas Duo

Modular

Cobas

Genscreen Ultra

Genscreen Plus

6,6-41,2

15,2-110

12-72,7

6,3-83,5

29,2-456

86,9-280,7

29,7-234,5

7,3-180,7

42,3-> 500

slide20

Sensibilité de détection des anticorps anti-VIH-1/2 chez les patients infectés dans différentes régions du monde (n=669)

  • 553 échantillons VIH-1-M :

113sous-type A: Cameroun, Ghana, Uganda, Grande Bretagne, France

75 sous-type B: Brésil, Cameroun,Thaïlande, Afrique du Sud, Grande Bretagne, France

71 sous-type C: Afrique du Sud, Uganda, Grande Bretagne, France

40 sous-type D: Cameroun, Afrique du Sud, Uganda, Grande Bretagne, France

11 sous-type F: Argentine, Brésil, Cameroun, France

9 sous-type G: Cameroun, Ghana,

83 CRF01-AE: Thaïlande

92CRF01-AG: Cameroun, Grande Bretagne

59 Mosaïques : Argentine, Brésil ,Cameroun, Ghana, Uganda, Grande Bretagne, France

  • 6 échantillons VIH-1-O (France, USA, Espagne, Cameroun: ESP2, 08692A, ABB009/96, ABB141/98, Ess, Rue)
  • 110 échantillons VIH-2 (Afrique de l’Ouest)
slide21

VIDAS DUO 1 VIH-1 sous-type F,

Genscreen v.2 1 VIH-1 groupe O,

Enzygnost 1 VIH-1 sous-type C

Genscreen Plus 1 VIH-1 sous-type B

Échantillons pré-séroconversions

slide22

Nouveaux tests Combinés apparus après 2000

Spécificité: nette amélioration trouvée dans certains tests

Sensibilité de détection d’Ag: nette amélioration.

Presque tous ont un seuil de détection inférieur à 50 pg VIH/ml

Problème de détection d’Ag des différents sous types VIH-1

Sensibilité de détection d’Ac: peut être moins bonne dans la détection des taux très faibles

slide23

Biomnis: Paris et Lyon

Août 2007-juillet 2008

slide25

Seuil de détection de l’Ag VIH-1SFTS (souche LAI sous-type B)

Vidas Duo Ultra 11,5 pg VIH/ml

Vidas Duo Quick 13

Genscreen Ultra HIV Ag/Ab 13

Architect HIV ½ Combo 18

Axsym HIV Combo 21

Murex HIV Ag/Ab Combo 29

Modular HIV Combi 126,5

Vironostika Uniform II Ag/Ab 150 50 ? version 2006

Enzygnost HIV Integral II < 50? 23 version 1

Detect HIV (v.4) 31 19,5

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Existence d’une variabilité du seuil de détection d’Ag p24 d’un lot à lot des tests combinés ?

Architect Combo : < 50 pg/ml

  • Rôle de l’Afssaps dans l’application de la recommandation HAS ?
  • -Liste officielle des tests combinés
  • Contrôle des lots : fabricants ou Afssaps ?
slide27

Remerciements

S. Laperche, INTS

S. Gonzalo, Biomnis Lyon

A. Bianchi, Laboratoire Départemental de Bondy

B. Lécolier (CEF)

J. Lupu (Centre Suchet, Paris)

J.Y. Mascart, AJ Morvan (Laboratoire Morvan Mascart, Paimpol)

J.P. Tréguier, JJ Lemoine (Laboratoire Tréguier Lemoine, Lannion)

S. Devare, P. Leroux, C. Brennan,(Abbott Laboratories)

L. Santucci, J.M. Jego, S. Gadelle, (Bio-Rad Laboratories)

O. Paour, (BioMérieux)

T. Vidalenc, B. Studer (Dade Behring)

F. Eberle, (Roche Diagnostics Laboratories)

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