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IgG. p24 Ag. IgM. 0. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Semaines. Sensitivité des différentes générations tests de dépistage. ARN VIH. 4 ème Géné ou T. combiné 1997. Fenêtre sérologique. 3 ème Géné 1989. 2 ème Géné 1988 (P. recombinantes ). 1 ère Géné 1985 (viral lysat).

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Presentation Transcript

IgG

p24

Ag

IgM

0

1

2

3

4

5

6

7

8

Semaines

Sensitivité des différentes générations tests de dépistage

ARN VIH

4ème Géné ou

T. combiné 1997

Fenêtre sérologique

3ème Géné 1989

2ème Géné 1988 (P. recombinantes )

1ère Géné 1985 (viral lysat)


Problème de Sensitivité des premiers tests combinés

Les tests combinés apparus entre 1997 et 2000 présentent un seuil de détection élevé par rapport au test d’antigène p24

  • Laperche et al., Transfus Clin Biol. 2000

  • Ly et al., Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2001

  • Weber, B. 2003. AIDS

Problème de Spécificité des premiers tests combinés

99,5 à 99,6 % moins bonne que les tests de détection d’anticorps

  • Gürtler et al., J. Virol. Methods. 1998

  • Weber et al., J. Clin. Microbiol. 1998

  • Ly et al., J. Clin. Microbiol. 2000


Sensitivité de la détection d’Ag p24

(panel d’Ag VIH SFTS : LAI sous-type B)


Séroprévalence élevée Population : 1.6%

  • 5 laboratoires

  • 29 657 échantillons 3ème génération et VIDAS HIV DUO

VIDAS HIV DUO / 3rd Gen EIApos/pos pos/neg neg/pos

453 160 42

Western blot positif 449 0 0

p24Ag positif 17

Suivi Western blot positif 4/4 17/17 0

29 002 négatifs

17/470 (3.6%) VIH infection détectée par VIDAS HIV DUO

Spécificité VIDAS Duo : 99.51% ;

Spécificité 3èmeGen EIA: 99.85%



Could the new HIV combined p24 antigen and antibody (Ag/Ab) assays replace p24 antigen specific assays ?

Ly et al.J. Virol. Methods 2007


Spécificité assays replace p24 antigen specific assays ?

1 005 échantillons négatives en VIH provenant de 4 laboratoires privés français


Sensitivité analytique: Limite de détection d’Ag VIH-1 assays replace p24 antigen specific assays ?

(panel d’Ag VIH SFTS : LAI sous-type B)


Panel BBI PRA 801 assays replace p24 antigen specific assays ?

- pgVIH/ml(panel de référence française SFTS ou Afssaps)

- pg p24/ml(DuPont)

- mIU/ml (W.H.O: Worth Health Organization)

x 3,6


Sensitivité clinique assays replace p24 antigen specific assays ?

23 VIH-1 Seroconversion Panels

  • 9 panels BBI :

    • 923, 932, 941, 944, 952, 953, 954, 957, 958,

  • 11 panels de NABI :

    • SV-0251, 261, 281, 321, 331, 371, 401, 404, 4888,

    • 37748, 122399,

  • 3 panels de BCP :

    • 9013, 9016, 6243


0 assays replace p24 antigen specific assays ?

1

2

3

4

5

6

7

8

Semaines

Importance du choix des panels de séroconversion

dans l’évaluation des tests Combinés

1

2

3

Test combiné

ou 4ème génération

IgG

Test d’anticorps

ou3ème génération

Ag p24

IgM


Retard par jours assays replace p24 antigen specific assays ?en moyenne vis à vis de PCR

< 20 pg/ml

5 – 6 jours

2004-2005

Detect HIV v.4

< 30 pg/ml

2001-2002

PCR

VIDAS DUO Ultra

4.04

VIDAS Ultro Quick

5

Coulter HIV-1 Ag

5.13

ARCHITECT HIV Combo

5.17

Genscreen HIV Ultra

5.5

AxSYM HIV Ag/Ab Combo

5.78

Cobas Core HIV Combi

6.17

6.78

Murex HIV Ag/Ab Combo

2004

7.76

Modular HIV Combi

VIDAS HIV DUO

8.09

8.29

Genscreen Plus HIV Ag/Ab Combo

Genscreen HIV 1/2 v2

8.78

< 2000

Enzygnost HIV Integral

9.37

Vironostika HIV Uniform II Ag/Ab

10

Ortho HIV-1/HIV-2 Ab Capture

10.25

0

2

4

6

8

10

12

Days

Classic Method: Maximum delay method

Format Microplaque


Retard par jours assays replace p24 antigen specific assays ?en moyenne vis à vis de PCR

PCR

3.5 – 4.5 jours

VIDAS DUO Ultra

2.35

ARCHITECT HIV Combo

2.74

2004-2005

VIDAS Ultro Quick

2.83

Coulter HIV-1 Ag

3.04

3.35

Genscreen HIV Ultra

3.48

AxSYM HIV Ag/Ab Combo

2001-2002

Murex HIV Ag/Ab Combo

3.86

Cobas Core HIV Combi

4.09

Genscreen Plus HIV Ag/Ab Combo

4.05

2004

4.73

Modular HIV Combi

5.17

VIDAS HIV DUO

< 2000

6.15

Genscreen HIV 1/2 v2

6.25

Enzygnost HIV Integral

6.6

Vironostika HIV Uniform II Ag/Ab

6.81

Ortho HIV-1/HIV-2 Ab Capture

Jour

0

1

2

3

4

5

6

7

8

Microplate format

Paul Erhlich Institut (PEI) calculation method (negative + 1 day)


Sensibilité de la détection des anticorps: Panel BCP assays replace p24 antigen specific assays ?9017

Ratio (s/co)= > 1 : Positif - < 0,9 : Négatif


Importance de la qualité des anticorps monoclonaux utilisés dans les trousses pour la détection d’Ag p24.

Tersmette et al., Virology, 1989“Detection and subtyping of HIV-1 isolates with a panel of characterized monoclonal antibodies to HIV p24 gag” : problème de détection d’Ag p24 avec les anticorps monoclonaux sur certaines souches virales.

Maniez et al, Spectra biologie, 1997« Évaluation des trousses de dépistage de l’Ag p24 du VIH »: 7 trousses d’Ag p24 avec problème de sensibilité vis-à-vis de certaines souches VIH-1.


Diversité du VIH utilisés dans les trousses pour la détection d’Ag p24. Conséquences pour la détection d’Ag p24

  • 31 surnageants de culture de sous-types VIH-1:

    1 A; 8 CRF01_AE (circulating recombinant ); 7 B; 5 C;3 D; 3 F; 1 G; 1 O; et 2 CRF02_AG

    Chaque surnagent ayant 4 concentrations différentes titrées avec la trousse Innotest HIV Antigen (Innogenetics):

    4 - 24 pg VIH /ml

    10 - 75

    22 - 150

    61 - 356


Limite de détection de l’Ag VIH avec 31 panels d’Ag utilisés dans les trousses pour la détection d’Ag p24.

Arcitect

AxSym

Murex

Vidas Ultra

Vidas Duo

Modular

Cobas

Genscreen Ultra

Genscreen Plus

6,6-41,2

15,2-110

12-72,7

6,3-83,5

29,2-456

86,9-280,7

29,7-234,5

7,3-180,7

42,3-> 500


Sensibilité de détection des anticorps anti-VIH-1/2 chez les patients infectés dans différentes régions du monde (n=669)

  • 553 échantillons VIH-1-M :

    113sous-type A: Cameroun, Ghana, Uganda, Grande Bretagne, France

    75 sous-type B: Brésil, Cameroun,Thaïlande, Afrique du Sud, Grande Bretagne, France

    71 sous-type C: Afrique du Sud, Uganda, Grande Bretagne, France

    40 sous-type D: Cameroun, Afrique du Sud, Uganda, Grande Bretagne, France

    11 sous-type F: Argentine, Brésil, Cameroun, France

    9 sous-type G: Cameroun, Ghana,

    83 CRF01-AE: Thaïlande

    92CRF01-AG: Cameroun, Grande Bretagne

    59 Mosaïques : Argentine, Brésil ,Cameroun, Ghana, Uganda, Grande Bretagne, France

  • 6 échantillons VIH-1-O (France, USA, Espagne, Cameroun: ESP2, 08692A, ABB009/96, ABB141/98, Ess, Rue)

  • 110 échantillons VIH-2 (Afrique de l’Ouest)


VIDAS DUO les patients infectés dans différentes régions du monde 1 VIH-1 sous-type F,

Genscreen v.2 1 VIH-1 groupe O,

Enzygnost 1 VIH-1 sous-type C

Genscreen Plus 1 VIH-1 sous-type B

Échantillons pré-séroconversions


Nouveaux tests Combinés apparus après 2000 les patients infectés dans différentes régions du monde

Spécificité: nette amélioration trouvée dans certains tests

Sensibilité de détection d’Ag: nette amélioration.

Presque tous ont un seuil de détection inférieur à 50 pg VIH/ml

Problème de détection d’Ag des différents sous types VIH-1

Sensibilité de détection d’Ac: peut être moins bonne dans la détection des taux très faibles


Biomnis: Paris et Lyon les patients infectés dans différentes régions du monde

Août 2007-juillet 2008



Seuil de détection de l’Ag VIH-1 dépistage ELISASFTS (souche LAI sous-type B)

Vidas Duo Ultra 11,5 pg VIH/ml

Vidas Duo Quick 13

Genscreen Ultra HIV Ag/Ab 13

Architect HIV ½ Combo 18

Axsym HIV Combo 21

Murex HIV Ag/Ab Combo 29

Modular HIV Combi 126,5

Vironostika Uniform II Ag/Ab 150 50 ? version 2006

Enzygnost HIV Integral II < 50? 23 version 1

Detect HIV (v.4) 31 19,5


Existence d’une variabilité du seuil de détection d’Ag p24 d’un lot à lot des tests combinés ?

Architect Combo : < 50 pg/ml

  • Rôle de l’Afssaps dans l’application de la recommandation HAS ?

  • -Liste officielle des tests combinés

  • Contrôle des lots : fabricants ou Afssaps ?


Remerciements p24 d’un lot à lot des tests combinés ?

S. Laperche, INTS

S. Gonzalo, Biomnis Lyon

A. Bianchi, Laboratoire Départemental de Bondy

B. Lécolier (CEF)

J. Lupu (Centre Suchet, Paris)

J.Y. Mascart, AJ Morvan (Laboratoire Morvan Mascart, Paimpol)

J.P. Tréguier, JJ Lemoine (Laboratoire Tréguier Lemoine, Lannion)

S. Devare, P. Leroux, C. Brennan,(Abbott Laboratories)

L. Santucci, J.M. Jego, S. Gadelle, (Bio-Rad Laboratories)

O. Paour, (BioMérieux)

T. Vidalenc, B. Studer (Dade Behring)

F. Eberle, (Roche Diagnostics Laboratories)


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