d lusyon ve
Download
Skip this Video
Download Presentation
DİLUSYON ve

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 27

DİLUSYON ve - PowerPoint PPT Presentation


  • 353 Views
  • Uploaded on

DİLUSYON ve. VÜCUT SIVILARINDA HÜCRE SAYIMI. Dilüsyonlar;. Konsantre solüsyondan, dilüe solüsyon hazırlamak için kullanılır. 1/10 luk dilüsyon demek; 1 kısım konsantre 9 kısım dilüent Ör; 1/5 kan dilüe edeceksek; 1 kısım kan 4 kısım SF.

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about ' DİLUSYON ve' - arav


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
d lusyon ve

DİLUSYON ve

VÜCUT SIVILARINDA HÜCRE SAYIMI

slide2

Dilüsyonlar;

  • Konsantre solüsyondan, dilüe solüsyon hazırlamak için kullanılır.

1/10 luk dilüsyon demek; 1 kısım konsantre

9 kısım dilüent

Ör; 1/5 kan dilüe edeceksek; 1 kısım kan

4 kısım SF

slide3

Olacak şekilde istenen hacimde

serum veya diğer biyolojik sıvılar

dilue edilebilir.

  • SORU; 1/5 dilusyon nasıl hazırlanır?

1 kısım serum

5 kısım total hacim

Örneğin; Total hacim 250 mikrolitre olacak şekilde serumu 1/5 nasıl dilue edebiliriz?

1 kısım serum

5 kısım total

X mikrolitre serum

250 mikrolitre total hacim

Cevap: 50 mikrolitre serum alınır, üzerine 200 mikrolitre distile su

ilave edilerek, 250 ml lik dilusyon elde edilmiş olur

slide4
Soru; 500 ml total hacimde, 1/4 dilusyon ile idrar hazırlandı, idrardan ne kadar alınmıştır?

Cevap; 1 kısım idrar

4 kısım total

X ml idrar

500 ml total

125 ml idrar alınır, üzerine 375 ml distile su eklenerek

toplam 500 ml lik dilusyon elde edilmiş olur

slide5
Tüpte 15 ml NaCl çözeltisi ve 3 ml serum mevcut.
  • Soru; serum dilusyon oranı nedir?

3 ml serum

15 + 3 ml serum

3/18

1/6

Soru;1/ 6 olacak şekilde serumu çeşitli şekillerde

dilue ediniz

Örneğin; 10 mikrolitre serum alınır, 50 mikrolitre SF

ile dilue edilir (total hacim 60 mikrolitre oldu (1/6)

Ya da 20 mikrolitre serum alınır, 100 mikrolitre SF ilave edilir (total hacim 120 mikrolitre oldu 20/120 1/6)

slide6

VÜCUT SIVILARINDA HÜCRE SAYIMI

Kan sayım cihazlarında aşırı uçta çıkan sonuçların periferik yayma ve neubauer lamı/thoma lamı ile yapılacak bir sayım ile teyit edilmesi hataları önlemek açısından önem taşımaktadır. Cihazda saydırılamayacak az miktarda sıvı,kan,idrar gibi örnekler de neubauer lamında sayılabilir.

Hücre sayımı, gerektiğinde kan dışındaki vücut sıvılarında da yapılabilir (örn; BOS, çeşitli mayiler, idrar…)

h cre sayimi
HÜCRE SAYIMI
  • Neubauer lamı (hemositometresi) üzerinde iki sayım alanı bulunur. Bu iki sayım alanı bir çukurluk ile birbirlerinden ayrılmıştır. Her bir sayım alanında köşelerde dört tane 1 mm2\'lik bölümler (büyük kareler) bulunur. Bunlar 16 tane orta büyüklükte kareye ayrılmıştır. (lökosit sayımı için)
  • Ortada bulunan büyük kare ise 25 tane orta büyüklükte kareye ayrılmıştır (eritrosit sayımı için).

Thoma lamı Neubauer lamı

slide8

L

L

E

L

L

Neubauer lamı

d l syon sivilari
DİLÜSYON SIVILARI

Eritrosit dilüsyon sıvısı olarak hayem sıvısı kullanılır.

(5 gr. Sodyum Sülfat, 1gr. Sodyum Klorür, 0.5 gr. Civa Biklorür ve 200 ml distile su içinde hazırlanır).

Bu sıvı, lökositleri ortamdan kaldırarak sadece eritrositlerin sayılmasını sağlar.

Lökosit dilüsyon sıvısı olarak; 3ml Glasiyel Asetik Asit,

1ml Gentian Violet\'in (%1\'lik çözeltisi) ve 100ml distile su içindeki karışımı kullanılır.

Bu eriyik de eritrositleri ortamdan kaldırır ve lökositlerin çekirdeklerini maviye boyayarak kolay görünmelerini sağlar.

Fakat sulandırma için sadece SF de kullanılabilir.

eritrosit say m

L

L

E

L

L

Eritrosit sayımı

Kan 1: 200 veya 1:100 oranında dilusyon sıvısı ile dilue edilir. Neubauer lamı üzerine temiz bir lamel yerleştirilir. Karışımdan 10 mikrolitre alınıp, lamelin altından Neubauer lamına pipetlenir. Kan hızla, lamel ile Neubauer lamındaki çizgili alan arasına dolar. Hücrelerin yerleşmesi için 1-2 dk beklenir. Mikroskopta 100x büyütmede hücrelerin düzgün dağılıp dağılmadığı kontrol edilir ve Mikroskop, sayım için 400x büyütmeye ayarlanır. Eritrositler, Neubauer lamının ortasında bulunan 25 karede sayılır.

eritrosit say m1

L

L

E

L

L

Eritrosit sayımı

Pipetleme sonrasında eritrositler, Neubauer lamının

ortasındaki 1mm2 lik alandaki 25 karede sayılır

(karelerin her birinin alanı 0,04mm2)..

Eritrosit sayısı/mm3:

25 karede 50 tane saydığımızı farzedelim;

Eritrosit sayısı X 10 (sabit sayı) =

50 X 10= 500 eritrosit/mm3 sonucunu buluruz.

Eğer dilüsyon yaptıysak, en son çıkan sonucu dilüsyon faktörü ile çarparız.

Yukardaki örnekte x5 dilüsyon yaptık diyelim, 500 bulduğumuz sonucu 5 ile çarparız, sonuç: 2500 RBC/mm3 olur.

slide12

L

L

E

L

L

Örneğin çok berrak bir BOS geldi, homojen hale getirip (hafif ters düz edip) neubauer lamına pipetledik (dilüsyon yok). Orta 25 karede toplam 1 tane eritrosit gördük.

Sonuç: 1 X 10 = 10 eritrosit/mm3’tür.

Örneğin, kanlı bir BOS geldi, x200 dilüsyon yaptık. Neubauer lamına pipetledik. Ve orta 25 karede 40 eritrosit saydık.

40 x 10 (sabit sayı) = 400.

Dilüsyon faktörü ile de çarparsak,

400 x 200 = 80000 eritrosit/mm3 sonucunu buluruz.

slide13

Eritrosit sayımı

Bu karelerin 25’inin hepsinin sayılması yerine rastgele 5 tanesi de sayılıp 5 ile çarpılabilir. En mantıklı olan, köşelerdeki ve ortadaki alandır. 25’e göre hesap yapıldığı için, 5 ile çarpmak gerekir.

Eritrosit sayısı/mm3:

Örneğin,

5 küçük karede toplam 2 eritrosit gördük diyelim;

2x5= 10 eritrosit (25 karede)

Sonuç: 10 x 10 = 100 eritrosit/mm3

Eğer dilüsyon yaptıysak, en son çıkan sonucu dilüsyon faktörü ile çarparız.

Yukardaki örnekte x10 dilüsyon yaptık diyelim, 100 bulduğumuz sonucu 10 ile çarparız, sonuç: 1000 RBC/mm3 olur.

slide14

Sayılan eritrosit sayısı x dilusyon (200)

=

  • 1: 200 dilusyonda, 5 kare eritrosit sayıldığında ;

Sayılan karelerin alanı ( mm2) x derinlik (mm)

5 x 0,04 (mm2) 0,1 (mm)

10.000 x sayılan eritrosit sayısı / mm3

=

slide15

Örneğin bir tamkan geldi, tamkan cihazı bozuk ve eritrosit sayısı isteniyor;

Hemoliz var mı diye kontrol ettik, hemoliz olmadığından emin olduktan sonra,

x800 dilüsyon yaptık ve neubauer lamında sayım yaptık. (orta 25 karede) 600 eritrosit saydık.

Hesap ???

slide16

Sizin bulduğunuz sonuç:

Cihazdan çıkan sonuç:

Örnek tamkan sayımı:

Lökosit 13,32 bin/mm3

Eritrosit 4,8 milyon/mm3

Hemoglobin 11,2 g/dl

Hematokrit 32.5 %

Platelet 200 bin/mm3

Eritrosit normal değer:

kadında 4,5.106

erkekte 5.106

l kosit say m

L

L

E

L

L

Lökosit sayımı
  • Genel teknik eritrosit sayımı ile aynıdır. Sadece sayım alanı farklıdır.
  • Kan, 1/20 oranında dilusyon sıvısı ile dilue edilir.
  • Neubauer lamı üzerine temiz bir lamel yerleştirilir.
  • Karışımdan 10 mikrolitre alınıp, lamelin altından Neubauer lamına pipetlenir.
  • Hücrelerin yerleşmesi için 1-2 dk beklenir. Mikroskopta 100x büyütmede hücrelerin düzgün dağılıp dağılmadığı kontrol edilir ve Mikroskop, sayım için 400x büyütmeye ayarlanır.
slide18

L

L

E

L

L

Neubauer lamı

slide19

L

L

L

L

E

E

L

L

L

L

Dört büyük lökosit sayım alanından biri, hesap için gereklidir. Dört büyük alandan tercih edilen birisi sayılabilir.

Diyelim ki, berrak bir BOS geldi, dilüsyona gerek kalmadan direk neubauer lamına pipetledik. Bir lökosit alanında 3 lökosit saydık. (Aynı sabit sayı olan 10 burada da geçerlidir).

3 x 10 = 30 lökosit/mm3 diye sonuç veririz.

Örneğin, berrak BOS sayımı için, iki alan saydık diyelim. Toplam 5 lökosit saydık. Bir alan için 2,5 olur.

2,5 x 10 = 25 lökosit/mm3 sonucunu buluruz.

slide20

L

L

E

L

L

Dört büyük kareyi sayıp 4’e bölmek daha sağlıklıdır. Çünkü hücreler homojen ya da orantılı dağılmamış olabilir. O yüzden 4 büyük alan sayılır. Dörde bölünür. Asıl sonuç budur. Ve sabit sayı 10 ile çarpılır.

Örneğin, berrak bir mayi geldi. Dilüsyona gerek kalmadan mayiyi homojen hale getirip neubauer lamına pipetledik. 4 büyük alanda toplam 5 lökosit saydık. Bir alan için 5/4= 1,25 lökosit buluruz.

1,25 x 10 = 12,5 lökosit/mm3 sonucunu buluruz.

slide21
Toplam sayılan alan 4 mm2 dir. (4 büyük karenin toplam alanı)

Lökosit sayısı / mm3;

Sayılan lökosit x dilusyon

=

Sayılan alan ( mm2) x derinlik (mm)

Köşelerdeki 4 büyük karenin sayıldığı düşünülürse;

Sayılan lökosit x dilüsyon faktörü

=

4 ( mm2) x 0.1 (mm)

l kosit say m1
Lökosit sayımı
  • Örneğin (x20 dilüsyonla) 4 büyük karede toplam hücre sayısı 8 olsun. Toplam lökosit sayısı nedir?
  • Cevap 1

Sayılan lökosit x 20

8 x 20

=

=

400 lök/mm3

Sayılan alan ( mm2) x 0,1 (mm)

4 x 0,1

Cevap 2

4 büyük karede toplam 8 hücre vardır

Bir karede ortalama 8/4= 2 hücre var demektir.

2x10 (sabit sayı)= 20 lökosit/mm3

20 x 20 (dilüsyon faktörü) = 400 lökosit/mm3

slide23

Örneğin, bulanık bir BOS geldi.

X 50 dilüsyon yaptık ve neubauer lamında 4 büyük alanda toplam 130 lökosit saydık. Sonuç nedir?

slide24

4 büyük alanda 130 lökosit saydıysak,

1 alan için 130/4 = 32,5 lökosit/mm3 buluruz.

32,5 lökosit x 10 (sbt) = 325 lokosit/mm3

Fakat bir de bu BOS’u sulandırdığımız için

sulandırma faktörü ile çarparız.

325 x 50 = 16250 lökosit/mm3

slide25

25 L

35 L

27 L

33 L

Soru: Lökosit sayımı için mor tüp geldi, SF ile x20 dilüsyon yapıp neubauer lamında sayım yaptık. 4 büyük alanda 25, 35, 27, 33 lökosit saydık. Sonucu nasıl rapor ederiz?

slide26

Cevap: 25+35+27+33=120

Bir alan için 120/4= 30 lökosit/mm3

30 x 10 = 300 lökosit/mm3

300 x 20 (dil.f.) = 6000 lökosit/mm3

Örnek tamkan sayımı:

Lökosit 6 bin/mm3

Eritrosit 4,16 milyon/mm3

Hemoglobin 11,2 g/dl

Hematokrit 32.5 %

Platelet 200 bin/mm3

lökosit normal değer:

4000-10000

trombosit say m
Trombosit sayımı
  • Trombositler yabancı maddelere ve birbirlerine karşı yapışkanlıkları fazla olduğundan ve de çok küçük hücreler olduklarından sayılmaları zordur.
  • Genelde bu yöntemle sayılmazlar, kan sayım cihazları ile sayımları tercih edilir
  • Bu yöntemle kan 1:100 dilue edilir ve eritrositlerin sayma alanında sayım yapılır.
ad