1 / 14

Facultad de Ciencias Experimentales

Facultad de Ciencias Experimentales. Área de Bioquímica y Biología Molecular. Oferta de Proyectos de Fin de Grado para GBTG - Curso 2012-2013. Función de los factores de transcripción GATA en el páncreas. Sabemos que en el ratón los factores de transcripción GATA4 y GATA6 juegan un

anthea
Download Presentation

Facultad de Ciencias Experimentales

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. Facultad de Ciencias Experimentales Área de Bioquímica y Biología Molecular Oferta de Proyectos de Fin de Grado para GBTG - Curso 2012-2013

  2. Función de los factores de transcripción GATA en el páncreas Sabemos que en el ratón los factores de transcripción GATA4 y GATA6 juegan un papel importante en el desarrollo y formación del páncreas. Si inactivamos conjuntamente GATA4 y GATA6 en estadios iniciales de formación del páncreas, el páncreas NO SE FORMA! (Carrasco et al., JournalofClinicalInvestigation, 2012) Ctrl Gata4 KO Gata6 KO Gata4/6 double KO ba esto du Esto: estómago Ba: bazo Du: duodeno Páncreas? Páncreas

  3. El objetivo de nuestro proyecto consiste en determinar el papel que juegan estos factores en la célula beta de los islotes de Langerhans Técnicas a desarrollar: -Análisis histológicos: Secciones en parafina e tejidos pancreáticos, tinciones con hematoilina y eosina, etc… -Análisis inmunohistoquímicos: Tinción con anticuerpos específicos en secciones de páncreas (incubación con anticuerpos, microscopía de fluorescencia, etc..) -Técnicas de PCR y qPCR (extracción de ARN, etc…) Anabel Rojas, CABIMER anabel.rojas@cabimer.es Tlfn:954 467 427

  4. Juan R. Tejedo beta-lactoglobulina (~65%), alfa-lactoalbumina (~25%), y seroalbúmina (~8%), Inmovilización de un anticuerpo anti-b-lactoglobulina para cromatografía de afinidad

  5. Estudios recientes han encontrado relación entre la beta Lactoglobulina y el desarrollo de diabetes tipo 1 en menores de 18 meses Hay una relación directa entre alimentación temprana con leche de vaca y alergias. -Anticuerpo monoclonal producido en ratón

  6. Resultados obtenidos SELECCIÓN DE HIBRIDOMAS Todos los sobrenadantes obtenidos fueron seleccionados por ELISA frente a la proteína completa BLG y frente a sus dos subunidades α y β. Leche de vaca BLG -BLG -BLG - + + + GG1A7 + + + - GG1B5 GG2C2 + + + + GG3G7 + + + + Los hibridomas GG1B5 y GG1A7 no reconocen la proteína BLG en su forma natural en la leche de vaca. GG4H3 + + + +

  7. PROPÓSITO DE LA INVESTIGACIÓN • Optimizar el procedimiento de inmovilización de inmunoglobulina en el laboratorio • Optimizar un protocolo de purificación de muestras de leche de vaca

  8. Estudio de los efectos de BIO y sus derivados en la activación de la vía Wnt y la auto-renovación de células troncales embrionarias de ratón FACTORES INTRÍNSECOS: Oct Sox2 Nanog ANTECEDENTES FACTORES EXTRÍNSECOS: FGF LIF Wnt BIO, ClLi PLURIPOTENCIALIDAD DIFERENCIACIÓN

  9. PROPOSITOS DEL PROYECTO • Manejo de técnicas de laboratorio: • Cultivo de células madre embrionarias • Técnicas de biología molecular: inmunocitoquímica, citometría, PCR, WB, … • Llevar a cabo una revisión bibliográfica LUGAR DE TRABAJO Yolanda Aguilera García yagugar@upo.es Área de Bioquímica y Biología Molecular

  10. PFG_2013-2014 Investigadora responsable: Marta Artal Sanz Antecedentes: La falta de prohibitinas (PHB-1 y PHB-2) mitocondriales produce efectos opuestos en el envejecimiento: reduce la longevidad de animales salvajes, mientras en condiciones de baja señalización por insulina (InsR/daf-2), aumenta la longevidad de forma dramática. Artal-Sanz and Tavernarakis (2009) Nature

  11. Objetivo PFG_2013-2014 Insulin DAF-2/InsR Descubrir los mecanismos celulares que interfieren con la función mitocondrial y afectan al envejecimiento utilizando el nematodo C. elegans PI3K P FOXO/ DAF-16 PKB/AKT

  12. Interacción mitocondria-rutas de señalización celular en la regulación del envejecimiento en C. elegans PFG_1 Identificación de rutas de señalización implicadas en la reducción del contenido de grasa causado por falta de PHB en animales salvajes y en mutantes de la ruta de la Insulina. DIC GFP Nile red RNAi screen for fat content Automated sorting and analysis phb-2 +/- phb-2 -/- + fluorescent dye: Nile Red Mutantes phb-2 muestran un fenotipo de reducción de grasa y ausencia de GFP en la faringe (panel izquierda). Los mutantes phb-2 se seleccionan utilizando el COPAS BIOSORT (panel derecha), en función de la ausencia de GFP, y distribuyen en placas (96 pozillos) que contienen bacteria que produce RNAi para cada gen del genoma de C. elegans y la prueba fluorescente Nile Red. + RNAi library

  13. Escrutinios genómicos para identificar reguladores de la respuesta al estrés mitocondrial en C. elegans PFG_2 Mitochondrial stress response Automated sorting and analysis BF GFP Merged phb-2 +/-; hsp-6::gfp phb-2 -/-; hsp-6::gfp Mutantes phb-2 muestran una fuerte inducción de hsp-6::GFP, una chaperona que responde al estrés mitocondrial (panel izquierda). Mutantes phb-2 se seleccionan utilizando el COPAS BIOSORT (panel derecha), en función de la presencia de GFP en todo el cuerpo, y distribuyen en placas (96 pozillos) que contienen bacteria que produce dsRNA para cada gen del genoma de C. elegans. Animales que expresan GFP sólo en la faringe son eliminados (botella). + RNAi library

  14. PFG_3 Metabolomics y envejecimiento en C. elegans Consecuencias Metabólicas de la falta de prohibitinas mitocondriales en animales salvajes y en mutantes de la ruta de la Insulina

More Related