1 / 22

Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ

Санкт-Петербургский Государственный Медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Кафедра госпитальной терапии им. акад. М.В. Черноруцкого. Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ У БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ. Научные консультанты

anastasia-sutton
Download Presentation

Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Санкт-Петербургский Государственный Медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Кафедра госпитальной терапии им. акад. М.В. Черноруцкого Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ У БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ Научные консультанты профессор Трофимов В.И. чл.-корр. РАН, профессор Дубина М.В.

  2. Актуальность Несмотря на выявление ключевых механизмов развития БА, успехи фармакотерапии, ТРБА остается наименее изученной, и ситуация с контролем БА в мире и РФ остается нерешенной «…отличительным признаком ТРБА является сложный контроль заболевания в связи со сниженной чувствительностью к терапии…»(Chung K.F., 2011)

  3. Цель исследования Оценить значение фармакогенетических факторов в терапии глюкокортикостероидами и бета2-агонистами у больных терапевтически резистентной БА и разработать критерии прогнозирования терапевтической резистентности с учетом генетических маркеров

  4. Задачи исследования 1. Определитьчастотыаллелей, обусловленныхмутациямиС3435Тгенамножественной лекарственной устойчивости (MDR1); Gly16Arg и Gln27Gluгенабета2-адренорецептора (ADRB2); Ile559Asn, Val729Ile, Ile747Met, Asn363Ser,Arg23Lysгенаглюкокортикоидного рецептора (NR3C1); С–589Тгенаинтерлейкина 4 (IL4) и Arg130Gln(IL13) у больных ТРБА и вконтрольной группе. 2. Определить уровень экспрессии изоформ ГРα и ГРβ, кодируемых геном NR3C1 у пациентов с БА до и после терапии ГКС 3. Выявить вклад всех вышеперечисленных генетических детерминант в формирование патогенетических и клинических фенотипов БА, а также их ассоциацию с ответом на терапию глюкокортикостероидами 4. Разработать алгоритм диагностики, в том числе молекулярно-генетического исследования, для выявления маркерного профиля терапевтической резистентности у больных БА

  5. Методы исследования • Общеклинические методы • Анамнез, физикальное исследование • Лабораторная диагностика • Клинический и биохимический анализ крови • Цитологическое исследованиемокроты • Гормональное исследование • Иммунологические исследования (IL4 и IL13 сыворотке крови (ИФА) • Функциональные показатели • Спирография - исследование ФВД • Статистические методы (Statistica 6)

  6. Методы молекулярно-генетического исследования Периферическая кровь ДНК ПЦР и рестрикционный анализ (ПЦР-ПДРФ) Стабилизация внутриклеточной РНК, реагент «Среда-РНК» РНК Производство ФГУН «ЦНИИЭ Роспотребнадзора», Россия Выделение РНК, набор реагентов «РИБО-золь-В» кДНК Обратная транскрипция, набор реагентов «РЕВЕРТА-L» Амплификатор ABI 7000 («Applied Biosystems», США) Реагенты производства «Синтол», Россия Метод TaqMan Эндогенный контроль: G-белок GNB2L1 ПЦР в режиме реального времени (real-time ПЦР)

  7. Обследованные лица Мужчины 30,3% n=37 Женщины 69,7% n=85 БА (n=122) (GINA 2008) • Группа контроля • (n=103) • возраст от 20 до 75 лет • отсутствие курения в анамнезе • без бронхолегочной, аллергической, • аутоиммунной и онкологической патологии • с неотягощенной наследственностью • по аллергическим заболеваниям • Дизайн: • случай- контроль • жители Северо-Западного региона • славянской национальности • не связанные узами родства Гендерный состав больных БА

  8. Терапевтически резистентная БА (ATS 2000) • Большие критерии • Потребность в применении ТГКС > 50% времени от длительности БА • Необходимость использования высоких доз ИГКС (беклометазон ≥1260 мкг/сутки, будесонид >1200 мкг/сутки, триамсинолон и флунизолид >2000 мкг/сутки, флутиказонпропионат >880 мкг/сутки) • Малые критерии • Ежедневная потребность в длительнодействующихβ-агонистах (ДДБА), теофиллине, антилейкотриеновах препаратах • Ежедневные симптомы астмы, требующие применения короткодействующих β-агонистов (КДБА) • Сохраняющаяся бронхообструкция ( ОФВ1< 80%, дневная вариабельность ПСВ > 20% ) • ≥ 1 вызова скорой помощи за последний год • ≥ 3 курсов терапии СГКС за последний год • Быстрое обострение БА при уменьшении на ≤ 25% дозы ИГКС или ТГКС • Жизнеугрожающие события, связанные с астмой в прошлом

  9. Распределение больных БА в зависимости от степени тяжести заболевания и терапевтической резистентности 12% (n=15) БА 45% (n=55) ТРБА 38% (n=46) ТЧБА 62% (n=76) 43% (n=52) ТБА СБА ЛБА ТРБА ТРБА ТЧБА ТЧБА 17% (n=8) 22% (n=17) 58% (n=44) 20% (n=15) 83% (n=38)

  10. Ген MDR1 Эффлюкс липофильных соединений транспортный белок Pgp-170 Апоптоз Изменение pH внутри клетки Генмножественной лекарственной устойчивости С3435Т MDR1

  11. Распределение генотипа 3435СС по гену MDR1у больных ТРБА и ТЧБА p=0,015 % p=0,001 p=0,007 p=0,049 Распределение генотипа 3435ТТ по гену MDR1у больных ТРБА и ТЧБА p=0,007 p=0,008 p=0,004 p=0,005 %

  12. Влияние генотипа 3435СС по гену MDR1 на риск развития БА ТРБА OR=20,89 (95% CI 5,10–85,53) OR=6,12 (95% CI 2,42–15,48) OR=5,22 (95% CI 2,11–12,92) OR=3,92 (95% CI 1,74 – 8,79)

  13. ADRB2 – ген бета2-адренорецептора Ген ADRB2 2-адренорецептор

  14. ТРБА ТЧБА Ассоциация аллельных вариантов Gly16Arg иGln27Glu по гену ADRB2 с ОФВ1 у больных ТРБА и ТЧБА p<0,001 p=0,004 p<0,001 p=0,020

  15. p<0,050 р=0,031 p<0,050 р=0,009 0,362 52,2 0,348 0,233 57,3 51,3 ТРБА 38,8 10,5 39,1 8,7 38,2 3,9 ТЧБА Контроль Распределение аллельных вариантов Arg130Gln гена IL13 у больных ТРБА и ТЧБА Частоты аллеля 130GlnгенаIL13

  16. NR3C1 – ген глюкокортикоидного рецептора 9 экзонов Альтернативный сплайсинг Изоформы ГР: Р γ А α 

  17. Экспрессия изоформ глюкокортикоидного рецептора у больных ЛБА и СБА в зависимости от терапии ГКС До лечения ГКС После лечения ГКС Экспрессия изоформыГРα Экспрессия изоформыГР 31,8 105,4 20,6 8,8 4,2 11,9 1,3 1,5

  18. Молекулярно-генетические и клинические аспекты ТРБА ↑экспрессии ГР ADRB2 27Glu MDR1 3435C NR3C1 363SN ГКТ: Длительная ГКТ ИГКС>1200 мкг Высокие дозы ТГКС ГКС-ассоциированные осложнения ТРБА  кортизола IL4 -589T ADRB2 16Gly Фатальные осложнения (астматический статус) Отягощенная наследственность ↑ потребности в КДБА ДН Нейтрофильное воспаление • ОФВ1, МОС75, • SGaw IL13 130Gln

  19. ТРБА Фенотип ТРБА Женский пол Курение Старший возраст ХОБЛ ГЭРБ Поздняя манифестация БА Нейтрофильное воспаление Ожирение Рестриктивные изменения ИБС Частично обратимая бронхообструкция ГБ Плохой контроль заболевания

  20. NR3C1 Лекарственные мишени: чувствительности к глюкокортикостероидам IL4, IL13 MDR1 Провоспалительныецитокины ADRB2 Транспорт эндогенных и экзогенных веществ Система детоксикации Лекарственные мишени: изменение функции 2-адренорецептора Молекулярно-генетические механизмы развития ТРБА Факторы внешней среды (инфекция, аллергены, поллютанты) Персистенция воспаления ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ мРНК ГР α/

  21. Алгоритм диагностики ТРБА Донозологическая диагностика БА Трудноконтролируемая БА Генетическое тестирование ПЦР Ген MDR1 (3435C) Ген IL13 (130Gln) Ген (-589Т) Ген ADRB2 (16GlyArg) Ген ADRB2 (27GluGlu) ПЦР в реальном времени Ген NR3C1 (изоформы ГР α/β) Стандартное клинико-лабораторное исследование Фенотип ТРБА ГЕНОТИП Персонифицированная терапия ТРБА

  22. Благодарю за внимание!

More Related