第 9 章 不发酵革兰阴性杆菌

1. 第9章 不发酵革兰阴性杆菌

2. 不发酵革兰阴性杆菌概 述 定义：一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌；多为条件致病菌。 重点 鲍曼不动杆菌革兰染色

3. 不发酵革兰阴性杆菌 假单胞菌属 (Pseudomonas) 产碱杆菌属 (Alcaligenes) 不动杆菌属 (Acinetobacter) 莫拉菌属 (Moraxella) 无色杆菌属 (Achromobacter) 金氏杆菌属 (Kingella) 黄杆菌属 (Flavobacterium) 艾肯菌属 (Eikenella) 土壤杆菌属 (Agrobacterium) 黄单胞菌属 (Xanthomonas) 丛毛单胞菌属 (Comamonas)

4. 重点 不发酵革兰阴性杆菌

5. 假 单 胞 菌 属 1．分类 假单菌属按rRNA同源性分5群，现把II群马勒伯克霍尔德菌属，IV群嗜麦芽窄食单胞菌属从假单胞菌属分出。 一群需氧、不发酵葡萄糖， 无芽胞，有鞭毛； 氧化酶阳性的革兰阴性杆菌； 多为条件致病菌。

6. 假 单 胞 菌 属 2．临床意义 假单胞菌属分布广泛，人类不发酵菌感染中，假单胞菌占70％～80％，主要为铜绿假单胞菌。

7. 3．微生物检验 (1)检验程序 (2)培养鉴定 革兰阴性、无芽胞、专性需氧。 有端鞭毛或丛鞭毛。 生长温度范围广，最适生长温度为35℃。 产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光素、脓褐素 (3)药物敏感性试验按 CLSI（Clinical and Laboratory Standards Institute）推荐，分为4组：A、B、C、Ｄ／Ｕ(P55)。

8. 致病机制 粘附素：黏附 结构成分 多糖似荚膜物质 毒素 内毒素：LPS 毒力因子 外毒素：A 阻止真核细胞蛋白质合成 S 干扰吞噬杀菌作用 绿脓菌素：具有氧化还原活性，催化超氧化物和 过氧化氢产生有毒基团 酶类 弹性蛋白酶:丝氨酸蛋白酶（Las-A） 降解弹性 锌金属蛋白酶（Las-B）蛋白 磷脂酶C:分解脂质和卵磷脂，损伤组织细胞 铜绿假单胞菌（P. aeruginosa)

9. 铜绿假单胞菌（P. aeruginosa)3．微生物检验 重点 铜绿假单胞菌革兰染色 （1）检验程序 （2）显微镜涂片 革兰阴性，长短不一， 一端有单鞭毛，运动 活泼。

10. 铜绿假单胞菌（P. aeruginosa) 血平板上圆形，大小不一，边缘不整齐，毛玻璃样，光滑，湿润，常融合，金属光泽，生姜味 有透明溶血环 产带荧光的水溶性色素青脓素与绿脓素 铜绿假单胞菌产荧光素

11. 铜绿假单胞菌（P. aeruginosa) 铜绿假单胞菌产绿脓素

12. 铜绿假单胞菌（P. aeruginosa） （3）分离培养与鉴定： 标本可接种于血琼脂平板培养基和选择性培养基，生长温 度25℃～42℃。 生化鉴定：氧化酶（＋）与触酶（＋）、 吲哚（－），甲基 红（－）， Vp（－）,枸橼酸盐利用（＋）,还原硝 酸盐并产生N2、氧化分解葡萄糖，产酸产气；分解 尿素、精氨酸酶（＋） 。

13. 铜绿假单胞菌（P. aeruginosa) （4）抗原检测：血清学分型、噬菌体分型。 （5）核酸检测：质粒指纹图分析、脉冲场凝胶电泳分析（PFGE pulsed field gel electrophoresis）、基因芯片、PCR技术、16SrDNA分型鉴定技术。

14. 铜绿假单胞菌（P. aeruginosa) （６）检验结果分析与报告： 诊断一定要与临床表现相结合。 治疗过程中，3～4天后重复药敏测试。

15. 耐药机制： 1.产酶 金属酶，OXA酶。 2.外膜蛋白的改变（Outer membrane proteins，OMP）为主要机制。 3.主动泵出机制 对喹诺酮类。　 MexA-MexB-OprM及MecC-MexD-Oprj 4.整合子 1类，3类 。 铜绿假单胞菌（P. aeruginosa)

16. 脑脊液、胸（腹）水、脓液、分泌物、痰、尿液、十二指肠引流液脑脊液、胸（腹）水、脓液、分泌物、痰、尿液、十二指肠引流液 粪便 血液、环境用品 分离培养： 直接涂片革兰染色 37 ℃ 分离培养： 1.肉浸汤 2.胰化酪蛋白 　大豆肉汤 血琼脂平板 SS、麦康凯 如生长 37℃ 培养18 ～ 24h 　挑选菌落鉴定 最后鉴定 　　　　初步鉴定 菌落特征、色素、绿脓素：+ 涂片、革兰染色、氧化酶：+ 分型 血清学 噬菌体 绿脓素 生化反应 铜　绿　假　单　胞　菌　检　验　程　序

17. 第二节 伯克霍尔德菌属 属于rRNA第II群。 洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia) 马勒伯克霍尔德菌(Burkholderia mallei ) 伪马勒伯克霍尔德菌(Bur rkholderia pseudomeuei) 了解

18. 伯克霍尔德菌属一、临床意义 1．洋葱伯克霍尔德菌 医院感染的常见病原菌之一； 引起败血症、肺炎、伤口感染、脓肿等； 囊性纤维化和慢性肉芽肿患者呼吸道感染的机会致病菌。

19. 伯克霍尔德菌属一、临床意义 2．马勒伯与伪马勒伯克霍尔德菌 鼻疽病与类鼻疽病的病原体；（肺鼻疽病 、皮肤鼻疽病、内脏脓肿、菌血症、脓毒血症 ）。 • 人类感染是经伤口、黏膜、呼吸道。 • 急性患者可有高热、衰竭等全身症状 。 • 为人兽共患病原菌；可能成为生物恐怖的细菌。

20. 伯克霍尔德菌属二、微生物检验 洋葱伯克霍尔德菌革兰染色 1．显微镜涂片 • 革兰阴性杆菌 • 无芽胞、无荚膜。 • 洋葱伯克霍尔德菌革兰染色

21. 伯克霍尔德菌属二、微生物检验 3．分离培养与鉴定 需氧菌；生长温度35℃。（血琼脂、麦康凯 ） 洋葱伯克霍尔德菌生长较缓慢；含铁培养基上可产生亮黄色色素 马勒鼻伯克霍尔德菌无鞭毛无动力，42℃不生长 伪马勒鼻伯克霍尔德菌一端有丛鞭毛(1~4根)， 4℃不能生长 生化鉴定

22. 第三节 嗜麦芽窄食单胞菌 一、分类 属于假单胞菌科的rRNA同源群Ⅴ。 嗜麦芽窄食单胞菌（S.maltophilia）和S. africana。 掌握

23. 嗜麦芽窄食单胞菌 二、临床意义 为条件致病菌。 呼吸道、泌尿道、伤口等部位感染，菌血症及心内膜炎。 在不发酵菌引起的感染中，仅次于铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌，居临床分离阳性率的第三位。

24. 嗜麦芽窄食单胞菌 嗜麦芽窄食单胞菌革兰染色 三 、微生物检验 1．显微镜涂片 • 革兰阴性，端鞭毛，(1~8)根， • 有动力、无芽孢、 无荚膜。

25. 嗜麦芽窄食单胞菌 三、微生物检验 2．分离培养与鉴定 （１）分离培养： 生长温度为35℃，4℃不长， 血琼脂、普通培养基。 菌落中等大小、圆形、光滑、湿润、产生不溶血的黄色色素。 嗜麦芽窄食单胞菌麦康凯培养基菌落

26. 嗜麦芽窄食单胞菌 三、微生物检验 2．分离培养与鉴定 （２）生化鉴定 氧化酶阴性； 液化明胶、水解七叶苷； 赖氨酸脱羧酶阳性。氧化分解麦芽糖。

27. 嗜麦芽窄食单胞菌四、药物敏感试验及结果解释嗜麦芽窄食单胞菌四、药物敏感试验及结果解释 治疗首选磺胺类：TMP/SMZ；喹锘酮类-环丙氟派酸或替卡西林/棒酸。 亚胺培南 (泰能，Imipenem)天然耐药。 药敏试验纸片法仅有三种抗生素：左氧氟沙星、米诺环素、复方磺胺有折点。其他药敏试验应选用肉汤、琼脂稀释法作MIC，或采用E-TEST的方法。

28. 第五节 产碱杆菌属一、分类 粪产碱杆菌(A.faecalis) 主要 皮乔特产碱杆菌(A.Piechaudii) 粪产碱杆菌亚型(A.faecalis typeⅡ) 木糖氧化产碱杆菌(A.xylosoxidans) 脱硝亚种(Subsp.denitrificans) 木糖氧化亚种(Subspxylosoxidans)

29. 产碱杆菌属 二、临床意义 人体的正常菌群 医院感染的病原菌之一 ，可引起抵抗力低下人群发生败血症，并可从患者体内呼吸道，尿液，血液及脑脊液中分离出来。 目前呼吸道插管患儿和囊性纤维化患者体内发现本菌定植。 了解

30. 产碱杆菌属 三、微生物检验 1．显微镜涂片 革兰氏阴性杆菌 周鞭毛、有动力 粪产碱杆菌革兰染色

31. 产碱杆菌属 三、微生物检验 2．专性需氧，最适生长温度为5℃~35℃， 普通培养基上生长 粪产碱杆菌麦康凯培养基菌落

32. 产碱杆菌属三、微生物检验 粪产碱杆菌O-F基础培养呈碱性 pH至8.6为本菌特点 氧化酶阳性 触酶阳性 不分解任何糖类 O-F基础培养呈碱性 脲素酶阴性 不液化明胶

33. 第四节 不动杆菌属 一、分类 醋酸钙不动杆菌(A.calcoaceticus) 洛菲不动杆菌(A.lwoffi) 溶血不动杆菌(A.haemolgticus) 鲍曼不动杆菌(A.baumannii) 琼氏不动杆菌(A.junii) 约翰逊不动杆菌(A.johnsonii)

34. 不动杆菌属 二、临床意义：为条件致病菌 在不发酵菌的感染中仅次于假单胞菌，近年呈上升趋势。 掌握

35. 不动杆菌属三、微生物检验 1．检验程序 2．显微镜涂片 革兰阴性杆菌，多为 球杆状，常见成对排 列，无芽胞，无鞭毛 鲍曼不动杆菌革兰染色

36. 不动杆菌属四、微生物检验 2．分离培养与鉴定 • 专性需氧菌 • 生长温度为35℃ • 普通培养基，麦康凯、血平板均生长 • 氧化酶阴性，动力阴性，硝酸盐试验阴性

37. 不动杆菌属 鲍曼不动杆菌菌落 在血琼脂培养基可形成圆形、灰白色、光滑、边缘整齐、直径2~3mm的菌落 洛菲不动杆菌菌落 小，直径为1~1.5mm 四、微生物检验 鲍曼不动杆菌麦康凯培养基菌落

38. 不动杆菌属 五、药物敏感试验及结果解释 Kirby-Bauer法做药敏试验，药物的选择与假单胞菌抗生素的分组相同。 鲍曼氏不动杆菌，对全部氨基青霉素、一代二代头孢菌素和一代喹诺酮类抗生素天然耐药。

39. 脑脊液、血液 脓汁、分泌物、尿液 分离培养 血液琼脂平板 麦康凯琼脂平板 增菌培养 直接涂片 革兰染色 35 ℃ ～ 37 ℃ 18h-24h 挑选可疑菌落 最后鉴定 生化反应 初步鉴定 KIA：底层、斜面不变 氧化酶 硝酸盐还原（—） 动力 不　动　杆　菌　属　检　验　程　序

40. 第六节 黄杆菌属一、分类 短黄杆菌 (F.breve) 脑膜炎败血性黄杆菌 (F.meningospticum) 芳香黄杆菌(F.odoratum) 水田黄杆菌(F.mizutaii) 嗜糖黄杆菌(F.multrivorum) 嗜醇黄杆菌(F.spiritivorum) 嗜温黄杆菌(F.thalpophilum) 薮内黄杆菌(F.gaduuchiae) Ⅱb群黄杆菌(F.group Ⅱb) Ⅱe群黄杆菌(F.group Ⅱe) Ⅱh群黄杆菌(F.group Ⅱh) Ⅱi群黄杆菌(F.group Ⅱi) 了解

41. 黄杆菌属 二、临床意义 是条件致病菌,长存于水，土壤，植物，，也可发现于食品，乳制品和蔬菜中。 医院感染的常见菌之一 引起败血症、新生儿及婴幼儿的化脓性脑膜炎

42. 黄杆菌属 三、微生物检验 1．显微镜涂片 革兰阴性杆菌 无鞭毛、无动力、无荚膜、无芽胞 脑膜炎败血性黄杆菌 革兰染色

43. 黄杆菌属 脑膜炎败血性黄杆菌 菌落 三、微生物检验 2．分离培养与鉴定 • 需氧代谢 • 氧化酶、触酶、磷酸酶阳性

44. 黄杆菌属 三、微生物检验 脑膜炎败血性黄杆菌血培养菌落 2．分离培养与鉴定 • 血琼脂培养基 • 生长温度为35℃ • 菌落：光滑、有光泽、边缘整齐，淡黄色，也有的呈黄色或棕黄色

45. 黄杆菌属四、药物敏感试验及结果解释 临床经验用药可选磺胺及大环内脂类的红霉素。 临床上常见的脑膜炎败血黄杆菌及芳香黄杆菌等对广谱抗菌药有耐药性，所以最好根据药敏试验选择用药。

46. 莫拉菌属 1.显微镜涂片 革兰阴性球杆菌， 呈双短链状排列，具有多形性。 了解 非液化莫拉菌革兰染色

47. 分离培养与鉴定 鉴定 氧化酶阳性 触酶阳性 无动力 不分解任何糖类 吲哚试验阴性 莫拉菌属： 人畜共患病，引起眼结膜炎、气管炎、肺炎、脑膜炎、脑脓肿、心包炎、心内膜炎及泌尿生殖系统炎症 三、微生物检验

48. 莫拉菌属 四、药物敏感试验及结果解释 对青霉素类敏感 对头孢类、四环素类、喹诺酮类、氨基糖甙类药物均为敏感 脑炎或脑膜炎、脑脓肿应注意药物通过血脑屏障的问题

49. 第八节 军团菌属一、分类 军团菌属(Legionella) 属于军团菌科（Legionellaceae） 常见的与人类疾病有关的军团菌： 嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）为主 米克戴德军团菌（L. micdadei） 长滩军团菌（L. longbeachae） 杜莫夫军团菌（L. dumoffii） 波兹曼军团菌（L. bozemanii） 掌握

50. 军团菌属二、临床意义 非肺炎型（庞蒂亚克热Pontiac fever）感染：潜伏期短，症状轻，乏力，肌痛，发热，干咳，发病率高，无死亡。 肺炎型:多器官损害，肺部、消化道及神经系统症状及体征，致死率高 。 医院感染可高达23% 。慢性心、肺、肾病变、艾滋病或接受免疫抑制剂者易发本病，且死亡率高达45%。