دانشگاه آزاد اسلامي واحد كرج

1. دانشگاه آزاد اسلامي واحد كرج

3. پایان نامه های 1

4. گروه : علوم پايه

5. رشته تحصيلي : زراعت و اصلاح نباتات

6. ( 85/7/26) تشخيص سريع مولکولي مايکوپلاسما پنومونيه در نمونه هاي کلينکي به روش PCR

7. نام و نام خانوادگي دانشجو : زهراالسادات حسيني ، شماره دانشجويي : 84357003326

8. به راهنمايي :جليل ونديوسفي • چكيده: • مايكوپلاسما پنومونيه عامل اتيولوژيك عفونتهاي دستگاه تنفسي در انسان ومسئول بيش از 20%از موارد پنوموني هاي كسب شده از جامعه است.روشهاي معمول براي تشخيص مايكوپلاسما پنومونيه با محدوديتهايي چون زمان بر بودن وعدم حساسيت كافي همراه است.روشهاي مولكولي از جمله واكحنش زنجيره اي پليمراز،روشي حساس وسريع را جهت تشخيص اين باكتري فراهم كرده است.در اين تحقيق ما دو روش كشت وPCRرا براي شناسايي مايكوپلاسما پنومونيه به كار برده ومقايسه نموديم وسعي كرديم تا روش سريع وعملي PCR را براي تشخيص اين باكتري طراحي كرده وبه كار ببريم .نمونه هاي كلينيكي از 100بيمار مبتلا به ناراحتي هاي تنفسي ،از لحاظ كشت و PCRمورد بررسي قرار گرفتند.روش PCR با به كار بردن پرايمرهاي P4AوP4B كه براي ژن هدف،ژن چسبندگي سلولي P1طراحي شده بودند،بر روي نمونه هاي سواب گلو گرفته شده از بيماران به كار رفت.هم چنين كشت نمونه هاي مزبور در محيط PPLO آگاردار داراي مكملها انجام گرديد. • محصول(345bp) PCR به وسيله روش PCR-Cloning در وكتور مناسب كلون شده وسپس با روش ختم زنجيره دي داكسي ،تعيين توالي گرديد.42مورد از نمونه ها (42%)نتايج مثبت را در روش PCR نشان دادند،در حاليكه تنها در 10مورد (10%) نتيجه كشت نمونه ها مثبت بود.حد شناسايي در روش PCRدر حد 10 ارگانيسم مايكوپلاسما پنومونيه ارزيابي گرديد.با اين وجود در آزمون ويژگي با مايكوپلاسماهاي انساني وحيواني ديگر وساير گونه هاي باكتريايي هيچ محصولي تكثير نگرديد.نتايج اين تحقيق نشان داد كه تكنيك مولكولي PCRابزاري مناسب براي تشخيص سريع،حساس ودقيق مايكوپلاسما پنومونيه در روشهاي تشخيص آزمايشگاهي مي باشدكه مي تواند به درمان مناسب بيماران با عفونت هاي تنفسي مزمن وطولاني مدت كمك كند .