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IL-27 转染人食管鳞癌细胞抗肿瘤 效应及其机理研究 - PowerPoint PPT Presentation


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IL-27 转染人食管鳞癌细胞抗肿瘤 效应及其机理研究. 河北医科大学第四医院 科研中心 河北省肿瘤研究所 刘丽华. 引 言. 我 国是食管癌的高发区,世界上约 50% 的食管癌发生在中国,到医院就诊的患者中 95% 为中晚期。 尽管通过手术、化疗和放疗使食管癌的生存率得到很大提高,平均 5 年生存率仍为 10% 。 近年来,肿瘤生物治疗受到了人们的关注,并逐渐成为肿瘤的第四种治疗方法。.

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Presentation Transcript

IL-27转染人食管鳞癌细胞抗肿瘤

效应及其机理研究

河北医科大学第四医院 科研中心

河北省肿瘤研究所

刘丽华


引 言

  • 我国是食管癌的高发区,世界上约50%的食管癌发生在中国,到医院就诊的患者中95%为中晚期。

  • 尽管通过手术、化疗和放疗使食管癌的生存率得到很大提高,平均5年生存率仍为10%。

  • 近年来,肿瘤生物治疗受到了人们的关注,并逐渐成为肿瘤的第四种治疗方法。


  • IL-12 family members:IL-12, IL-23 and IL-27 is primarily produced from activated antigen presenting cells (monocytes, macrophages and dendritic cells) whereas IL-35 is produced by regulatory T cells. These cytokines are all composed of two subunits, a helical subunit (IL-12p35、IL-23p19、IL-27p28、IL-35p35) and a soluble cytokine receptor-like subunit (IL-12p40、IL-23p40、IL-27EBI3、 IL-35EBI3).



目 的

  • 本研究旨在探讨IL-27基因转染对人食管癌细胞在裸鼠体内的抗肿瘤效应及其对免疫功能的影响,探讨其抗肿瘤作用机制。


方法

逆转录

病毒载体

(LXSN/IL-27)

G418

Lipofectamine

Ψ2/

IL-27

Ψ2

PA317/

IL-27

polybrene

G418

病毒

PA317

Eca109/

IL-27

polybrene

病毒

G418

Eca109

Eca109/

LXSN

……

细胞转染


方法

建立动物模型

Eca109/IL-27

Eca109/LXSN

Eca109细胞

1×107个细胞/只

腹腔接种

皮下接种

成瘤性、生存期

肿瘤体积

(mm3)=长径×短径2×1/2


Il 27

方法

IFN-g

ELISA

肿瘤组织

LDH

NK杀伤活性

免疫组化

NK

RT-PCR

RNA

T-bet, IL-12Rb2, TNF-a, IL-1b and IL-6

IL-27对免疫调节作用研究


结果

蛋白水平鉴定转染成功

Eca109/IL-27细胞的培养上清中检测到IL-27,其含量为153.73±7.0pg/ml。而在Eca109/LXSN细胞和野生型Eca109细胞的培养上清中未检出IL-27。


结果

b-actin

500bp

b-actin

500bp

EBI3 (706bp)

P28 (231bp)

M A B C M A B C

IL-27基因表达

基因水平鉴定转染成功

Fig.1 Expression of IL-27 EBI3 and p28 gene in different cells dected by RT-PCR. M: DNA marker; A:Eca109/IL-27 cells; B: Eca109/LXSN cells; C: Eca109 cells.


结果

*

*

IL-27对肿瘤生长的影响

生存期

56±4day

54±3day

97±4day *

Fig.2 Tumor’s growth in nude mice inoculated subcutaneously with different tumor cells. * vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P<0.01


结果

Eca109/IL-27 Eca109/LXSN Eca109

12.6±1.2% * 8.4±0.9% 7.8±0.7%

Fig.3 Infiltration of NK cells in tumor tissues from nude mice after inoculation with different cells.* vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P<0.05

IL-27对移植瘤组织NK细胞浸润数量的影响


结果

*

(

*

*

Fig.5 Cytotoxic activity of spleen cells from nude mice after inoculation different tumor cells.* vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P<0.05

IL-27对荷瘤裸鼠脾细胞免疫功能的影响

(

*

Fig.4 IFN-g production from spleen cells afterinoculation different tumor cells.* vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P<0.01


结果

Fig.6 Gene expression in tumor tissues after inoculation different tumor cells detected by RT-PCR. A: Eca109; B: Eca109/LXSN; C: Eca109/IL-27

IL-27对移植瘤组织中细胞因子表达的影响


讨 论

讨论

  • 本研究结果表明,接种IL-27转染细胞组裸鼠移植瘤生长缓慢、裸鼠生存期延长,移植瘤组织中仍有IL-27的表达,表明IL-27在裸鼠体内产生了抗肿瘤作用。

  • IL-27受体高表达于NK细胞,因而我们进一步检测了移植瘤组织中NK细胞浸润的数量。结果表明,接种IL-27转染细胞组移植瘤组织间质中NK细胞浸润数量增高,效应分子IFN-g产生增多,杀伤活性增强。说明IL-27不仅可以募集NK细胞而且能够增强其生物学效应。


讨论

  • 研究结果显示接种Eca109/IL-27细胞组移植瘤组织中T-bet和IL-12Rb2基因的表达水平增高。IL-27增强NK细胞产生IFN-g的分子基础是IL-27与受体结合后活化STAT1,增加转录子T-bet表达,进而作用于靶基因促进IL-12Rb2和IFN-g等的转录。因此我们在分子水平上证明IL-27能够促进NK细胞产生IFN-g。


讨论

  • 接种Eca109/IL-27细胞组移植瘤组织中Thl类细胞因子TNF-a、IL-1b和IL-6基因的表达亦升高。TNF-a在介导肿瘤细胞凋亡中起重要作用,在Thl型反应中具有重要辅助作用,IL-1b不仅对肿瘤细胞周期有阻滞作用,对NK细胞产生IFN-g还起到促进作用,而IL-6在肿瘤基因治疗研究中的作用已经得到公认,这些细胞因子的表达都直接或间接与IFN-g产生有关。

    因而,IL-27能够增强荷瘤裸鼠免疫功能而发挥抗肿瘤效应。



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